Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1M-糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现去甲自身HIV到显现1改型癌症流行病学呕吐的成效率在儿童时期就有很好的所述，多个去甲自身HIV构造性的儿童里有70%在血清转换后10年内患上癌症，而随访15年的儿童这一比例减小到84%。相较之下，占流行病学1改型癌症一半以上的改型1改型癌症的发病的系统还不会得到充分的比对。

更为多的人开始使用分段系统来定义1改型癌症的成效：生物体在显现多种去甲自身HIV时进入第1先决条件，显现血糖异常时进入第2先决条件，显现呕吐时进入第3先决条件。一些多发去甲自身HIV构造性的生物体，在1期和2期，成效快速，并发展为发病的1改型癌症。我们此前所述了一两组在首次测定到多种去甲自身HIV抽取后至少10年无癌症的极很慢成效者，这两组病征人数少，但构造相比较明确。随后，我们发掘出去甲自身上皮细胞特异性CD8+T细胞会底物在成效较快的病征里原则上不存在，但在近期发病和长期存在的癌症病征里很较易测定到。这有可能证明，与成效病征相较，这些病征自身免疫底物的闭环弱化。

早期相相比较，尽管闭环性T细胞会(Treg)数量正常，但癌症病征存在一些原则上功能局限性，其里包含对IL-2的底物灵活性减小。此外，癌症病征里的不稳定性CD4+T细胞会有可能对闭环来得具抵抗性，展现出为不稳定性T细胞会的可抑制消散，自然转化成的Treg和体外转化成的可抑制Treg，以及上皮细胞经历的CD4+T细胞会里IL-2底物消散。本比对的最终目标是所述了CD4+闭环性T细胞会(Treg)在一小群极较快成效者里的构造，他们的平均年龄组为43岁(31-72岁)，随访星期为18-32年。

方法：BOX比对是一项以人群为基础的中轴比对，在21岁以下胃癌的病征亲人里检查1改型癌症的危险因素。我们此前所述了长期较快成效者的构造，他们保证多重去甲自身HIV构造性超过10年，但不会显现癌症的流行病学呕吐，很慢性或非顺利进行性自身免疫。随后，10名继续保证无癌症并愿意提供大量血液抽取的较快成效者纳入T和B细胞会原则上功能比对。在目前的比对里，8名很慢成效者(SP两组)，里位年龄组43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的去甲自身HIV构造性。所有的两组织者都处于1改型癌症成效的1期，尽管一些人随后无法控制了去甲自身HIV对某些上皮细胞的构造性底物，然而，一名病征已经处于2期至少6年，但不会显现流行病学呕吐，一名病征被治疗为癌症，该受试者72岁，在采集实验抽取时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据比对里对该小分子顺利进行了实质上风险评估。复合外周血单个核细胞会(PBMCs)，采用多参数流式细胞会忍术和T细胞会可抑制实验风险评估小分子里Treg的基频、表改型和原则上功能。使用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和紧接著)顺利进行无统筹聚类比对，风险评估Treg表改型。

结果：与身心健康小分子相较，来自很慢成效体的思绪CD4+T细胞会的统筹聚类辨识，可抑制的思绪CD4+ Treg基频减小，与免疫可抑制可抑制的TNFR之外细胞(GITR)解读减小有关。一名HbA1c升高的病征与成效较快者和冗余的对照两组相较，Treg谱有所不同。原则上功能相相比较，与身心健康小分子相较，来自较快成效体的Treg介导的CD4+不稳定性T细胞会可抑制值得注意受损。展现出为对不稳定性CD4+T细胞会CD25和CD134解读的可抑制减小。

所示1 深入的表改型比对辨识，CD4+Treg亚改型在很慢成效描述符里减小。由FlowSOM填充的Treg室，聚集在来自所有小分子的活CD4+CD45RA -细胞会上。根据上面物解读鉴定出10个元簇:思绪T细胞会_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;思绪T cell_4;CD49b思绪T细胞会;HLA-DR + GITR +思绪T细胞会;闪存Treg_1;闪存Treg_2;闪存Treg_3;和闪存Treg_4。(a)使用9个不同Treg上面填充的10个元簇的MST。每个数据流代表一个炮兵部队(100个炮兵部队)，来得大的元炮兵部队(10个元炮兵部队)在数据流两组外围上色。每个数据流里的饼所示透露单个上面的解读层级。(b)每个元聚类的热所示，以辨识全面性上面解读。(c, d)为HD两组(c)和SP两组(d)填充所示，以及FlowSOM识别的每个元簇的裂口。(e-l)相比总质量为每个metacluster箱相所示(总质量> 0.05%)确定为HD和SP两组:闪存Treg_2 (e),闪存Treg_3 (f),闪存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +思绪T细胞会(h)、思绪T cell_1(i),思绪T cell_2 (j),思绪T cell_3 (k) n d CD49b思绪T细胞会(l)。深蓝色白点代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon筛选符号秩检验。此键适用于所示形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

所示2 使用CITRUS的预测模改型证实，Treg基频的减小是成效较快的标志。分级去极化(a - f)和柑橘比对(g-k)相比较SP两组织者和冗余的HD两组织者在CD4+CD45RA−T细胞会上的差异性。(a)表型CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l人群的代表性所示。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR解读顺利进行复合，模拟FlowSOM人群。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)两组以及小分子SP 606(深蓝色)里CD25+ cd127的基频综合所示。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+去极化子集的箱相所示;(c) HLA-DRloGITR−(闪存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(闪存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(闪存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+闪存T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3解读强度着色，箭头引人注意的簇被识别为SP和HD描述符之间的不同。(j)箱相所示辨识了在SP(蓝点)和HD(灰点)两组里，CITRUS思绪Treg_3和Treg_4的相比总质量(比例)。(k)数据集辨识每个簇的表改型(黄色)和Treg上面相比解读与故事情节解读(紫色);上列，闪存Treg_3;下面一行，闪存Treg_4。故事情节与所有其他簇里上面的解读有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon筛选符号秩检验

所示3 与身心健康献血者相较，成效较快者思绪treg的GITR减小。每个思绪CD4+T细胞会元簇(思绪T细胞会_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;CD49b +思绪T细胞会;HLA-DR + GITR +思绪T细胞会;闪存Treg_2;闪存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)测定每个解读上面的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)描述符的解读热所示(sp606不包含在内)。(c,d)思绪Treg_4元簇里所有HD(灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(深蓝色)的FlowSOM GITR解读串联，辨识数据集(c)和综合所示(d)。Wilcoxon筛选符号秩和检验，p< 0.07(深蓝色)所有小分子包含，p< 0.05(紫色)小分子SP 606和冗余的HD不包含在测试里。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里GITR解读，从分级去极化，从所有HD(灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(深蓝色)串联，辨识数据集(e)和综合所示(f) *p< 0.05, Wilcoxon筛选符号秩检验

所示4 来自较快成效的CD4+ treg细胞会控制不稳定性CD4+T细胞会的灵活性减小。SP两组用紫色的本站和白点透露，HD两组用黄色的本站和白点透露，深蓝色的本站/白点透露小分子sp606。使用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会顺利进行分选。CD4+CD25−(；也者)被上面为CFSE, Treg按判读的比例滴定。用抗CD3 /28微珠增殖细胞会，人才培养3天后顺利进行流式细胞会忍术测定。(a-d)与CD4+；也者相比应的treg人才培养(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD；也者人才培养。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE可抑制比率(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的可抑制比率。使用构造性对照(可抑制的响应细胞会仅有treg)量度可抑制比率。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相比较测试

所示5 不稳定性CD4+T细胞会对较快成效的T细胞会增殖的可抑制来得敏感。SP两组用紫色的本站和白点透露，HD两组用黄色的本站和白点透露，深蓝色的本站/白点透露小分子sp606。使用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会顺利进行分选。CD4+CD25−(；也者)被cfsel上面，treg按判读的比例滴定。用抗CD3 /28微珠增殖细胞会，人才培养3天后顺利进行流式细胞会忍术(CD25反染)和细胞会因子比对。HD Treg与HD、SP或sp606；也者一同人才培养。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE可抑制调升(b)。(c,d) CD25可抑制调升(c)和CD134可抑制调升(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才培养里的解读。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相比较测试

事实：我们得出的事实是，来自较快成效子的增殖思绪CD4+Treg在GITR解读里得到了拓展和丰富多彩，强调了必要性比对Treg在1改型癌症风险生物体里的异质性的必要性。

标题中有：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28